Interaktion von Deletionsmutanten von Staphylococcus aureus mit menschlichen Zellen

Inhaltsverzeichnis

• Einleitung
  • Staphylococcus aureus
    • Allgemeines und klinische Bedeutung
    • Virulenzfaktoren von S. aureus
    • Intrazelluläres Vorkommen und Persistenz von S. aureus
    • Nebraska Transposon Mutant Library
    • Auswahl der USA300 JE2-Mutanten
  • Verwendete Zelllinien
  • Ziel dieser Arbeit
• Materialien und Methoden
  • Chemikalien
  • Geräte und Verbrauchsmaterialien
  • Arbeiten mit tierischen Zellen
    • A549 Lungenepithel-Zellen
    • THP1 Leukämie-Monozyten-Zellen
    • Zellzahlbestimmung
    • Einfrieren von THP1 und A549-Zellen
  • Arbeiten mit Mikroorganismen
    • Bakterienstämme
    • Bestimmung der Korrelation zwischen CFU/ml und OD 600
    • Erstellung von Stocks
  • Analytik
    • Kultivierung in Infektionsmedium
    • Bakterielle Infektion
    • Lactat Dehydrogenase Release Assay
    • Durchflusszytometrie zur Messung von Apoptose und Nekrose
• Ergebnisse
  • Colony forming units von S. aureus für die Bestimmung der MOI
  • Infektion von A549- und dTHP1-Zellen mit S. aureus Stämmen
    • Wachstum von S. aureus Stämmen in Infektionsmedium
    • Viablität von internalisierten S. aureus Stämmen

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Diese Arbeit befasst sich mit der Untersuchung der Interaktion von Deletionsmutanten von Staphylococcus aureus mit menschlichen Zellen. Das Ziel ist es, die essentiellen Gene für die Etablierung von S. aureus-Infektionen in menschlichen Zellen zu identifizieren. Dabei werden die Virulenz und Persistenz ausgewählter Mutanten in einem Zellkulturinfektionsmodell mit menschlichen professionellen Phagozyten (differenzierte THP1-Zellen) sowie nicht-professionellen Phagozyten (A549-Zellen) untersucht.

• Identifizierung von essentiellen Genen für die Infektion mit S. aureus
• Untersuchung der Virulenz und Persistenz von S. aureus-Mutanten
• Analyse der Interaktion von S. aureus mit menschlichen Phagozyten
• Rolle von Aminosäure-Transport und Toxin-Produktion für die Pathogen-Host-Interaktion
• Bedeutung von Eisenerwerb für das Überleben von S. aureus in Wirtszellen

Zusammenfassung der Kapitel

Die Einleitung führt in die Thematik ein und beleuchtet die klinische Bedeutung von Staphylococcus aureus sowie die Mechanismen seiner Virulenz. Es werden außerdem die Nebraska Transposon Mutant Library und die Auswahl der USA300 JE2-Mutanten erläutert. Die Materialien und Methoden beschreiben die verwendeten Zelllinien, Bakterienstämme, Kulturmethoden und Analyseverfahren. Die Ergebnisse präsentieren die Untersuchungsergebnisse zur Virulenz und Persistenz der S. aureus-Mutanten in den verschiedenen Zellmodellen.

Schlüsselwörter

Staphylococcus aureus, Deletionsmutanten, Virulenz, Persistenz, intrazelluläres Pathogen, professionelle Phagozyten, nicht-professionelle Phagozyten, THP1-Zellen, A549-Zellen, Nebraska Transposon Mutant Library, Aminosäure-Transport, Toxin-Produktion, Eisenerwerb.