Untersuchungen zur Organisation und Sequenz menschlicher Histongene

Inhaltsverzeichnis

• 1. Einleitung
• 2. Material und Methoden
• 2.1. Material
• 2.1.1. Chemikalien
• 2.1.2. Reagenziensätze
• 2.1.3. Enzyme
• 2.1.4. Nucleotide
• 2.1.5. Zellen
• 2.2. Methoden
• 2.2.1. Analyse einer menschlichen Genbibliothek
• 2.2.1.1. Aufbau und Herkunft
• 2.2.1.2. Reagenzien
• 2.2.1.3. Herstellung von Agarplatten
• 2.2.1.4. Aussaat von Bakteriophagen
• 2.2.1.5. Transfer von Phagen-DNA auf Nitrocellulose
• 2.2.1.6. Hybridisierungssonden
• 2.2.1.7. Hybridisierung von membrangebundener DNA
• 2.2.1.8. Autoradiographie
• 2.2.1.9. Anlegen von Bakteriophagenstammkulturen
• 2.2.2. Präparation von Bakteriophagen-DNA
• 2.2.2.1. Reagenzien
• 2.2.2.2. Präparation aus Plattenlysaten
• 2.2.2.3. Präparation aus Flüssigkulturen
• 2.2.2.4. Präparation in kleinem Maßstab
• 2.2.2.5. Aufreinigung von Phagenlysat mit Lambdasorb-Antikörpern (Promega)
• 2.2.2.6. Aufreinigung von Phagenlysat mit DEAE-Cellulose
• 2.2.3. Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen
• 2.2.3.1. Reagenzien
• 2.2.3.2. Durchführung
• 2.2.4. Agarose-Gelelektrophorese von DNA
• 2.2.4.1. Reagenzien
• 2.2.4.2. Durchführung
• 2.2.5. Dot-Blot-Analyse von DNA
• 2.2.5.1. Reagenzien
• 2.2.5.2. Durchführung
• 2.2.6. Übertragung von DNA auf Membranfilter
• 2.2.6.1. Kapillarblot nach Southern
• 2.2.6.2. Diffusionsblot nach Reed und Mann
• 2.2.7. Markierung von DNA
• 2.2.7.1. Radioaktive Markierungstechniken
• 2.2.7.2. Nichtradioaktive Markierungen
• 2.2.8. Isolierung von DNA-Fragmenten aus Gelen
• 2.2.8.1. Extraktion aus Low-Melting-Point (LMP)-Agarosegel
• 2.2.8.2. Isolierung aus TypII-Agarosegel
• 2.2.9. Subklonierung von DNA-Fragmenten
• 2.2.9.1. Verwendete Vektoren
• 2.2.9.2. Dephosphorylierung von Vektoren
• 2.2.9.3. Vorbereitung der DNA-Fragmente
• 2.2.9.4. Ligation

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die Dissertation untersucht die Organisation und Sequenz menschlicher Histongene. Ziel ist es, detaillierte Einblicke in die molekularen Mechanismen der Genstruktur und -funktion zu gewinnen.

• Analyse menschlicher Histongene
• Untersuchung der Genorganisation
• Sequenzierung von DNA-Fragmenten
• Anwendung verschiedener molekularbiologischer Methoden
• Detaillierte Beschreibung der verwendeten Methoden

Zusammenfassung der Kapitel

Kapitel 1 (Einleitung) führt in das Thema der menschlichen Histongene ein und beschreibt den aktuellen Forschungsstand. Kapitel 2 (Material und Methoden) detailliert die verwendeten Materialien, Chemikalien, Reagenzien und die angewandten Methoden, einschließlich der Analyse einer menschlichen Genbibliothek, der Präparation von Bakteriophagen-DNA, der Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen, der Agarose-Gelelektrophorese und der Subklonierung von DNA-Fragmenten.

Schlüsselwörter

Histongene, Genorganisation, DNA-Sequenzierung, Molekularbiologie, Genbibliothek, Restriktionsenzyme, Klonierung, Agarose-Gelelektrophorese.