Bachelorarbeit, 2010
39 Seiten, Note: 1,3
A. Einleitung
B. Kompensatorische Phosphorylierung
I. Reversible Phosphorylierung als Grundlage
1. Massenwirkungskinetik
2. Michaelis-Menten-Kinetik
a. Einstellung des Fließgleichgewichts
b. Veränderung von v1 und v2
c. Signalantwortverhalten
II. Beeinflussbarkeit der Konzentration des aktiven Enzyms
III. Kompensation von Konzentrationsschwankungen
1. Unabhängigkeit von K/P durch Bifunktionalität
2. Unabhängigkeit von ET durch Autokatalyse
3. Unabhängigkeit von ET durch einseitige Sättigung
a. Heuristisches Modell mit Michaelis-Menten-Kinetik
b. Problematik der Anwendung von Michaelis-Menten-Kinetik
c. Anwendung von Massenwirkungskinetik bei zwei Bindungsstellen
aa. Kinaseaktivität des Dreierkomplexes und geordnete Bindung
bb. Kinase- und Phosphataseaktivität sowie ungeordnete Bindung
IV. Kompensatorische Phosphorylierung in E.coli und Cyanobakterien
1. Glyoxylatabzweigung in E.coli
2. Glyoxylatabzweigung in Cyanobakterien
3. Pyruvatdehydrogenasekomplex in Cyanobakterien
C. Zweikomponentensysteme
I. Mechanismus der Invarianz
II. Vorkommen in E.coli und in Cyanobakterien
D. Multiple Phosphorylierung in zweikomponentigen Systemen
I. Multiple Phosphorylierung
II. Regulation der Glutaminsynthetase über PII in E.coli
III. Regulation von PII und der Glutaminsynthetase in Cyanobakterien
E. Zusammenfassung
Die Arbeit untersucht die Mechanismen der robusten Regulierung bei der Proteinphosphorylierung in Bakterien, mit einem besonderen Fokus auf den Vergleich zwischen E.coli und Cyanobakterien. Das primäre Ziel ist es zu analysieren, wie Zellen durch kompensatorische Prozesse trotz schwankender Komponentenkonzentrationen präzise auf Umweltveränderungen reagieren können, um die Homöostase aufrechtzuerhalten.
I. Reversible Phosphorylierung als Grundlage
In der einfachsten Form der Phosphorylierungsmöglichkeiten wird ein Protein durch Dephosphorylierung mittels einer Phosphatase aktiviert und durch Phosphorylierung mittels einer Kinase deaktiviert (Grafik 1) bzw. umgekehrt. Bei diesem Mechanismus wird insgesamt mehr von dem benötigten Enzym produziert, aber nur ein bestimmter Teil durch Phosphorylierung aktiviert. Auf diese Art und Weise kann sich die Zelle schnell auf wechselnde Umweltbedingungen einstellen, indem sie einfach das Protein durch ein Signal an die Kinase bzw. Phosphatase ein- und ausschaltet.
Die reversible Phosphorylierung, wie sie hier dargestellt ist, ist chemisch gesehen eine so genannte O-Phosphorylierung. Als O-Phosphorylierung wird die ATP-abhängige Phosphorylierung von Serin-, Threonin- und Tyrosinresten unter Ausbildung einer Phosphomonoesterbindung bezeichnet. Diese Art der Phosphorylierung wurde zuerst in Eukaryonten entdeckt. Die Bedeutung in Bakterien und Archaea tritt aufgrund biochemischer und genomischer Analysen zunehmend zutage.
Die O-Phosphorylierung spielt in Cyanobakterien eine wichtige Rolle bei Adaptionsprozessen unter verschiedenen Bedingungen wie z.B. bei verschiedenen Beleuchtungen, bei Salzstress, bei der Heterocystenbildung und bei unterschiedlichen Nährstoffangeboten. In Cyanobakterien wurden diverse Serin-, Threonin- und Tyrosinkinasen und -phosphatasen identifiziert. Ihre physiologischen Bedeutungen sind aber bisher nicht bekannt. Die komplette Sequenzierung des Genoms von Anabaena variabilis zeigte 76 putative Kinasen und Phosphatasen auf. Das ist bisher die größte Anzahl unter den prokaryontischen Genomen und lässt auf komplexe Signaltransduktionen schließen.
Die Dynamik von Signalübertragungsketten (Kinetik) wird gemeinhin durch Differentialgleichungen dargestellt. Im Folgenden werden auf die reversible Phosphorylierung in Grafik 1 zwei verschiedene Differentialgleichungen angewendet. Die Massenwirkungskinetik beruht auf einfacher Stöchiometrie, während die Michaelis-Menten-Kinetik darauf aufbauend noch die Möglichkeit der Sättigung an einem Enzym-Substrat-Komplex berücksichtigt.
A. Einleitung: Diese Einleitung führt in die Bedeutung der Homöostase und der posttranslationalen Proteinmodifikation ein und stellt die Forschungsfrage nach den robusten Regulationsmechanismen in Cyanobakterien im Vergleich zu E.coli.
B. Kompensatorische Phosphorylierung: Dieses Kapitel erläutert, wie durch reversible Phosphorylierung Konzentrationsschwankungen ausgeglichen werden, und untersucht Mechanismen wie Autokatalyse und einseitige Sättigung zur Stabilisierung aktiver Enzymmengen.
C. Zweikomponentensysteme: Hier wird analysiert, wie Sensorkinasen und Regulatoren als globale Rückkopplungssysteme Invarianz gegenüber Schwankungen der Komponentenkonzentrationen erreichen.
D. Multiple Phosphorylierung in zweikomponentigen Systemen: Dieses Kapitel untersucht, wie durch die multiple Phosphorylierung eines Proteins, wie beispielsweise bei PII, differenzierte Signalantworten und robuste Regulation in komplexen Kaskaden möglich sind.
E. Zusammenfassung: Die Zusammenfassung resümiert die gewonnenen Erkenntnisse und stellt die regulatorischen Unterschiede zwischen E.coli und Cyanobakterien in einer Übersichtstabelle gegenüber.
Phosphorylierung, Cyanobakterien, E.coli, Homöostase, Signaltransduktion, Massenwirkungskinetik, Michaelis-Menten-Kinetik, Zweikomponentensystem, Invarianz, Robustheit, Enzymregulierung, PII-Protein, O-Phosphorylierung, Stoffwechselanpassung, Rückkopplung.
Die Arbeit behandelt die Mechanismen der Proteinphosphorylierung als Mittel zur robusten Regulierung von zellulären Prozessen und vergleicht dabei das Modellorganismus E.coli mit Cyanobakterien.
Zentrale Themen sind die reversible Phosphorylierung, kompensatorische Mechanismen zur Stabilisierung von Enzymkonzentrationen, die Dynamik von Signaltransduktionsketten und die Rolle von Zweikomponentensystemen.
Das Ziel ist aufzuzeigen, wie Zellen durch spezifische Phosphorylierungsmechanismen eine konstante Antwort auf Umweltreize garantieren, unabhängig von natürlichen Schwankungen der beteiligten Komponentenkonzentrationen.
Die Arbeit nutzt mathematische Modellierungen mittels Differentialgleichungen, wobei sowohl die Massenwirkungskinetik als auch die Michaelis-Menten-Kinetik angewendet werden, um die Signalantwort zu analysieren.
Der Hauptteil analysiert die mathematischen Grundlagen der kompensatorischen Phosphorylierung, die Rolle von bifunktionalen Enzymen, die Kinetik von Zweikomponentensystemen sowie die Regulation über multiple Phosphorylierung bei Proteinen wie PII.
Schlüsselwörter sind insbesondere Phosphorylierung, Invarianz, Robustheit, Cyanobakterien, Signaltransduktion und kompensatorische Regulation.
In E.coli erfolgt eine klare kompensatorische Phosphorylierung, während in Cyanobakterien bislang keine derartige reversible Phosphorylierung an der Glyoxylatabzweigung nachgewiesen werden konnte; dort scheint eher eine Gendeaktivierung vorzuliegen.
Beim PII-Protein ermöglicht die multiple Phosphorylierung eine fein abgestufte Reaktion auf den Stickstoff- und Kohlenstoffstatus der Zelle, was eine robustere und differenziertere Signalverarbeitung erlaubt als eine einfache An-Aus-Schaltung.
Die Arbeit verdeutlicht, dass bei der Ausbildung von Dreierkomplexen die einfache Michaelis-Menten-Kinetik nicht ausreicht und stattdessen die Massenwirkungskinetik bevorzugt angewendet werden sollte.
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