Charakterisierung der Komplexbildung zwischen Zellpenetrierenden Peptiden und Oligonukleotiden

Inhaltsverzeichnis

• Zusammenfassung
• Einleitung
  • Oligomere Nukleinsäure-Wirkstoffe
    • Aptamere
    • Steric block Oligonukleotide
    • short interfering RNA
  • Nukleinsäuretransport in die Zelle
  • Zellpenetrierende Peptide
  • Vorarbeiten
  • Zielsetzung
• Material und Methoden
  • Materialien
    • Chemikalien
    • Puffer
    • Verbrauchsmaterialien
    • Geräte
    • Verwendete Peptid-Carrier
    • Verwendete Oligonukleotid-Cargos
    • Verwendete Fluorophore
  • Methoden
    • Peptid- und Nukleinsäure-Konzentrationsbestimmung
    • Lagerung und Behandlung der CPPs
    • Stopped-Flow Messungen
      • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
      • Bestimmung der Komplexstöchiometrien
      • Heparin induzierte Komplexdissoziation
    • Dynamische Lichtstreuung (DLS)
    • Radioaktive Markierung von Nukleinsäuren
    • EMSA
    • Autoradiographie
    • Computer-unterstützte Hydrophobizitätsbestimmungen von Peptiden
• Ergebnisse
  • MPGa
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • MPGẞ
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fpEbola-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fplVHA-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fpRSV-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fpFertilina-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • MPGa + 6K
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fpBLV-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • fpSV-NLS
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
  • fpMVi-NLS und fpMVn-NLS
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • (Arginin)7
    • Transientenkinetische Analyse der Komplexbildung
    • Komplexgrößenanalyse mittels DLS
    • Nachweis der Komplexbildung und -stabilität
  • Linker-NLS
  • Übersicht der kinetischen Parameter der Komplexbildung
  • Zusammenfassung der DLS-Messungen
  • Zusammenfassung der EMSA-Versuche
  • Korrelation zwischen Komplexgröße und Geschwindigkeit der Komplexassoziation
  • Heparin induzierte Komplexdissoziation
  • Hydrophobizitätsbestimmung von CPPs
• Diskussion
  • Mechanismus der Komplexbildung
  • Geschwindigkeit der Komplexbildung in Abhängigkeit von der Peptidkonzentration
  • Einfluss der hydrophoben Domäne auf die Komplexgröße und Komplexstabilität
  • Einfluß der hydrophoben Domäne auf die Transfektionseffizienz
• Anhang
  • Abkürzungsverzeichnis

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Diese Bachelorarbeit befasst sich mit der Charakterisierung der Komplexbildung zwischen zellpenetrierenden Peptiden (CPPs) und Oligonukleotiden. Ziel ist es, die Kinetik der Komplexbildung zu untersuchen und die Faktoren zu identifizieren, die die Geschwindigkeit, Größe und Stabilität des Komplexes beeinflussen. Darüber hinaus soll der Einfluss der hydrophoben Domäne des CPPs auf die Komplexbildung und die Transfektionseffizienz untersucht werden.

• Kinetik der Komplexbildung zwischen CPPs und Oligonukleotiden
• Einfluss der Peptidkonzentration auf die Geschwindigkeit der Komplexbildung
• Bedeutung der hydrophoben Domäne für die Komplexgröße und Stabilität
• Korrelation zwischen Komplexgröße und Transfektionseffizienz
• Untersuchung des Einflusses von Heparin auf die Komplexdissoziation

Zusammenfassung der Kapitel

Die Arbeit beginnt mit einer Einleitung, die den Hintergrund der Forschung und die Relevanz der Thematik erläutert. Anschließend werden die verwendeten Materialien und Methoden detailliert beschrieben. Im Kapitel „Ergebnisse“ werden die gewonnenen Daten präsentiert und analysiert. Diese umfassen u.a. die transientenkinetische Analyse der Komplexbildung, die Komplexgrößenanalyse mittels DLS und die Untersuchung der Komplexstabilität. Die Ergebnisse werden anschließend in der Diskussion eingeordnet und interpretiert. Abschließend werden die wichtigsten Erkenntnisse zusammengefasst und ein Ausblick auf zukünftige Forschungsmöglichkeiten gegeben.

Schlüsselwörter

Zellpenetrierende Peptide, Oligonukleotide, Komplexbildung, Kinetik, Hydrophobizität, Transfektion, Heparin, Stopped-Flow, DLS, EMSA, Transientenkinetische Analyse.