Die Umsatzrate der AMP-Desaminase im Meerschweinchenherzen

Inhaltsverzeichnis

• 1 Einleitung
• 1.1 Allgemeines
• 1.2 Kardialer Adenosin- und Adenin-Nukleotid-Stoffwechsel
• 1.3 Enzyme im Adenosin- und Adenin-Nukleotid-Stoffwechsel
• 1.3.1 AMP-Desaminase (EC 3.5.4.6)
• 1.3.1.1 Enzymkinetik
• 1.3.1.2 Effektoren der AMP-Desaminase
• 1.3.1.3 Regulation der AMP-Desaminase-Aktivität
• 1.3.2 5'-Nukleotidase (EC 3.1.3.5)
• 1.3.3 Adenosin-Desaminase (EC 3.5.4.4)
• 1.3.4 Purin-Nukleosid-Phosphorylase (EC 2.4.2.1)
• 1.3.5 Xanthin-Oxidase (EC 1.3.2.3)
• 1.3.6 Hypoxanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase (EC 2.4.2.8)
• 1.4 Inhibition der am Purin-Stoffwechsel beteiligten Enzyme
• 1.5 Fragestellung
• 2 Material und Methoden
• 2.1 Modelle
• 2.1.1 Isolierte Perfusion nach Langendorff
• 2.1.1.1 Präparation
• 2.1.1.2 Versuchsanlage
• 2.1.1.3 Enzymaktivität im Gewebehomogenat
• 2.1.2 Isolierte Kardiomyozyten
• 2.1.3 Generelle Versuchsdurchführung
• 2.2 Inhibitoren
• 2.2.1 Inhibition der Adenosin-Desaminase durch EHNA
• 2.2.2 Inhibition der Xanthin-Oxidase durch Allopurinol
• 2.2.3 Inhibition der AMP-Desaminase durch GP 3521 und GP 3449
• 2.2.4 Inhibition der Adenosin-Desaminase und AMP-Desaminase durch Coformycin
• 2.2.5 Methotrexat
• 2.3 Protokolle und Fragestellungen
• 2.3.1 Abschätzung der Umsatzrate der AMP-Desaminase unter verschiedenen Bedingungen
• 2.3.1.1 EHNA und Allopurinol
• 2.3.1.2 GP 3521
• 2.3.1.3 Effekte von GP 3521 unter hypoxischen Bedingungen
• 2.3.1.4 Purinfreisetzung unter GP 3449 und EHNA
• 2.3.1.5 Abschätzung der Umsatzrate der AMP-Desaminase unter Coformycin
• 2.3.2 Einfluss der Purin-de-novo-Synthese
• 2.3.3 Hemmbarkeit der AMP-Desaminase im myokardialen Gewebeextrakt
• 2.3.4 Myokardialer Nukleotid- und Nukleosidgehalt nach Ischämie
• 2.3.5 Zellpermeabilität von Kardiomyozyten
• 2.4 Analytische Methoden
• 2.4.1 Probenaufbereitung
• 2.4.1.1 Probenaufbereitung für die HPLC zur Bestimmung von Adenosin, Inosin, Hypoxanthin, Xanthin und Harnsäure

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die Dissertation untersucht die Umsatzrate der AMP-Desaminase im Meerschweinchenherzen. Ziel ist es, die Aktivität dieses Enzyms unter verschiedenen Bedingungen zu bestimmen und Einflussfaktoren zu identifizieren.

• Charakterisierung der AMP-Desaminase-Aktivität im Meerschweinchenherzen
• Einfluss von Inhibitoren auf die AMP-Desaminase-Aktivität
• Untersuchung des Purinstoffwechsels unter verschiedenen Bedingungen (z.B. Hypoxie)
• Analyse des Einflusses der Purin-de-novo-Synthese
• Bestimmung des myokardialen Nukleotid- und Nukleosidgehalts nach Ischämie

Zusammenfassung der Kapitel

1 Einleitung: Dieses Kapitel bietet einen umfassenden Überblick über den kardialen Adenosin- und Adenin-Nukleotid-Stoffwechsel, einschließlich der beteiligten Enzyme wie AMP-Desaminase, 5'-Nukleotidase, Adenosin-Desaminase, Purin-Nukleosid-Phosphorylase, Xanthin-Oxidase und Hypoxanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase. Es werden die Enzymkinetik, Effektoren und die Regulation der AMP-Desaminase detailliert beschrieben. Die Bedeutung dieser Enzyme für die Herzfunktion und die Fragestellung der Dissertation werden prägnant zusammengefasst. Es wird der Forschungsstand zum Thema dargelegt und die Notwendigkeit der Untersuchung der AMP-Desaminase-Umsatzrate im Meerschweinchenherzen begründet. Die Einleitung legt die Grundlage für das Verständnis der nachfolgenden experimentellen Ansätze und Ergebnisse.

2 Material und Methoden: In diesem Kapitel werden die verwendeten Modelle (isolierte Langendorff-Perfusion und isolierte Kardiomyozyten), die eingesetzten Inhibitoren (EHNA, Allopurinol, GP 3521, GP 3449, Coformycin, Methotrexat), die Versuchsprotokolle und die analytischen Methoden (HPLC) detailliert beschrieben. Es werden die experimentellen Strategien zur Abschätzung der AMP-Desaminase-Umsatzrate unter verschiedenen Bedingungen, einschließlich hypoxischer Bedingungen und unter dem Einfluss verschiedener Inhibitoren, erläutert. Die methodische Vorgehensweise zur Bestimmung des myokardialen Nukleotid- und Nukleosidgehalts und der Zellpermeabilität von Kardiomyozyten wird ebenfalls klar dargelegt, um die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse sicherzustellen. Die Beschreibung umfasst eine präzise Darstellung aller Schritte, die für die Durchführung der Experimente notwendig waren.

Schlüsselwörter

AMP-Desaminase, Meerschweinchenherz, Purinstoffwechsel, Enzymkinetik, Inhibitoren, Hypoxie, Ischämie, Nukleotide, Nukleoside, HPLC, Kardiomyozyten, Langendorff-Perfusion.

Häufig gestellte Fragen zur Dissertation: Kardialer Purinstoffwechsel

Was ist das zentrale Thema der Dissertation?

Die Dissertation untersucht die Umsatzrate der AMP-Desaminase im Meerschweinchenherzen. Im Fokus steht die Charakterisierung der Enzymaktivität unter verschiedenen Bedingungen und der Einfluss verschiedener Faktoren darauf.

Welche Methoden wurden in der Dissertation verwendet?

Es wurden isolierte Langendorff-Perfusionen und isolierte Kardiomyozyten als Modelle verwendet. Zur Inhibition der am Purinstoffwechsel beteiligten Enzyme kamen verschiedene Inhibitoren (EHNA, Allopurinol, GP 3521, GP 3449, Coformycin, Methotrexat) zum Einsatz. Die Analyse der Nukleotide und Nukleoside erfolgte mittels HPLC.

Welche Enzyme des Purinstoffwechsels werden in der Arbeit behandelt?

Die Arbeit befasst sich ausführlich mit der AMP-Desaminase (EC 3.5.4.6), 5'-Nukleotidase (EC 3.1.3.5), Adenosin-Desaminase (EC 3.5.4.4), Purin-Nukleosid-Phosphorylase (EC 2.4.2.1), Xanthin-Oxidase (EC 1.3.2.3) und Hypoxanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase (EC 2.4.2.8). Die Enzymkinetik, Regulation und Inhibition dieser Enzyme werden detailliert beschrieben.

Welche Bedingungen wurden in der Untersuchung der AMP-Desaminase berücksichtigt?

Die Umsatzrate der AMP-Desaminase wurde unter verschiedenen Bedingungen untersucht, darunter unter dem Einfluss verschiedener Inhibitoren, unter hypoxischen Bedingungen und im Hinblick auf die Purin-de-novo-Synthese. Der myokardiale Nukleotid- und Nukleosidgehalt nach Ischämie wurde ebenfalls analysiert.

Welche spezifischen Fragestellungen wurden bearbeitet?

Die Arbeit untersucht die Abschätzung der Umsatzrate der AMP-Desaminase unter verschiedenen Bedingungen (inkl. Einfluss von Inhibitoren wie EHNA, Allopurinol, GP 3521 und Coformycin), den Einfluss der Purin-de-novo-Synthese, die Hemmbarkeit der AMP-Desaminase im myokardialen Gewebeextrakt, den myokardialen Nukleotid- und Nukleosidgehalt nach Ischämie und die Zellpermeabilität von Kardiomyozyten.

Welche Schlüsselwörter beschreiben die Arbeit am besten?

AMP-Desaminase, Meerschweinchenherz, Purinstoffwechsel, Enzymkinetik, Inhibitoren, Hypoxie, Ischämie, Nukleotide, Nukleoside, HPLC, Kardiomyozyten, Langendorff-Perfusion.

Welche Modelle wurden für die Experimente verwendet?

Die Experimente wurden an isolierten Meerschweinchenherzen mittels Langendorff-Perfusion und an isolierten Kardiomyozyten durchgeführt.

Wie wurde der myokardiale Nukleotid- und Nukleosidgehalt bestimmt?

Der myokardiale Nukleotid- und Nukleosidgehalt wurde mittels HPLC nach geeigneter Probenaufbereitung bestimmt.