Diplomarbeit, 2004
86 Seiten, Note: Sehr Gut
1. EINLEITUNG
1.1 POLYPHENOLE
1.1.1 BIOVERFÜGBARKEIT UND STOFFWECHSEL
1.1.2 ERNÄHRUNGSPHYSIOLOGIE
1.2 PROTEINE
1.2.1 PROTEINFÄLLUNG
1.2.2 PROTEINDENATURIERUNG
1.2.3 LYSOZYM
2. ZIEL DER DIPLOMARBEIT
3 MATERIAL UND METHODE
3.1 MATERIALIEN
3.2 METHODEN
3.2.1 CHROMATOGRAPHIE
3.2.2 HPLC (HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY)
3.2.3 MASSENSPEKTROMETER (MS)
4 VERSUCHSBESCHREIBUNG
4.1 ANSATZ I
4.1.1 REAKTION VON QUERCETIN MIT LYSOZYM UND BSA BEI 37°C UND 60°C
4.1.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.1.3 ERGEBNIS
4.2 ANSATZ II
4.2.1 REAKTION VON QUERCETIN MIT LYSOZYM UND BSA BEI 60°C UND 80°C
4.2.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.2.3 ERGEBNIS
4.3 ANSATZ III
4.3.1 REAKTION VON QU. MIT LYSOZYM UND HÄMOGLOBIN BEI 60°C UND 80°C
4.3.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.3.3 ERGEBNIS
4.4 GEGENPROBE (1) DER ANSÄTZE I-III
4.4.1 LYSOZYM UND QUERCETIN BEI 60°C UND 80°C
4.4.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN (60°C UND 80°C)
4.4.3 ERGEBNIS
4.5 GEGENPROBE (2) DER ANSÄTZE I-III
4.5.1 GELELEKTROPHORESE (SDS-GELE)
4.5.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.5.3 ERGEBNIS
4.6 GEGENPROBE (3) DER ANSÄTZE I-III
4.6.1 VORVERSUCHE (AUSSCHLUSSPRINZIP)
4.6.2 REINIGUNG DER SÄULE
4.6.3 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.6.4 ERGEBNIS
4.7 ÜBERPRÜFUNG DER METHODE VON HARSHADRAI M. RAWEL ET.AL. (2000)
4.7.1 MOTIVATION FÜR DIESE ÜBERPRÜFUNG
4.7.2 AUFBEREITUNG DER PROBEN
4.7.3 ERGEBNIS
5 ERGEBNISSE UND DISKUSSION
5.1 FRAGESTELLUNGEN
5.2 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE
6. LITERATUR
7. ANHANG
7.1 ABKÜRZUNGEN
7.2 NORMIERTE WERTE (MULTIPLIKATIONSFAKTOR 3,45)
7.3 METHODEN
Die Diplomarbeit untersucht die thermische Stabilität von Quercetin und dessen potenzielle Wechselwirkungen mit Proteinen, insbesondere Lysozym, um Auswirkungen auf dessen gesundheitsfördernde Eigenschaften bei Stoffwechselprozessen zu analysieren.
1.2.3 Lysozym
Dieses Enzym kommt beim Huhn im Eiweiß und beim Menschen in der Tränenflüssigkeit, Speichel und im Schweiß vor. Es dient der Zerstörung von Bakterien indem es den Polysaccharidanteil der Bakterienzellwand abspaltet. Die Bakterienzellwand sorgt für den mechanischen Halt, aber ohne sie nimmt der osmotische Druck im Inneren der Zelle zu, wodurch der mechanische Halt nicht mehr gegeben ist und die Zelle platzt [Stryer,1981]
Das Lysozym ist ein kleines antibakterielles Enzym mit einem MG von 14,6 kd und besteht aus einer einzelnen Polypeptidkette von 129 Aminosäuren. Dieses wird in großen Mengen aus Hühnereiweiß gewonnen. Es besitzt und 4 Disulfidbrücken welche die Gestalt des Lysozyms stabilisieren.
Aus der Konformation des Lysozyms ergibt sich eine spezifische Funktion welche für dieses Enzym einzigartig ist. Es besitzt an der Oberfläche eine Tasche. Diese ist jener Teil des Proteins mit dem es sein Zielbakterium erkennt, bindet und unschädlich macht (siehe Abb.2) [Stryer,1981]
1. EINLEITUNG: Einführung in die Bedeutung von primären und sekundären Pflanzenstoffen für die menschliche Ernährung und Darstellung der Grundlagen zu Polyphenolen und Proteinen.
2. ZIEL DER DIPLOMARBEIT: Definition der qualitativen Analyse möglicher Wechselwirkungen zwischen Quercetin und Lysozym bei 60°C und 80°C als zentrales Untersuchungsziel.
3 MATERIAL UND METHODE: Auflistung der verwendeten Materialien sowie detaillierte Erläuterung der chromatographischen Verfahren und eingesetzten technischen Instrumente.
4 VERSUCHSBESCHREIBUNG: Detaillierte Dokumentation der experimentellen Ansätze, der Probenaufbereitung und der durchgeführten Gegenproben zur Untersuchung der thermischen Stabilität.
5 ERGEBNISSE UND DISKUSSION: Zusammenfassung und kritische Analyse der experimentellen Ergebnisse hinsichtlich der Stabilität von Quercetin und seiner Reaktivität mit verschiedenen Proteinen.
6. LITERATUR: Verzeichnis der in der Arbeit zitierten wissenschaftlichen Quellen.
7. ANHANG: Ergänzende Informationen, Abkürzungsverzeichnis und detaillierte Tabellen zu den normierten Messwerten der Versuchsreihen.
Quercetin, Lysozym, Polyphenole, Proteine, HPLC, thermische Stabilität, Antioxidantien, Gelelektrophorese, Proteinbindung, Lebensmittelchemie, Bioverfügbarkeit, chemische Reaktion, Proteindenaturierung.
Die Arbeit untersucht die thermische Stabilität von Quercetin und analysiert, ob und wie dieses Flavonoid bei höheren Temperaturen mit Proteinen wie Lysozym wechselwirkt oder reagiert.
Die zentralen Themenbereiche umfassen die Chemie der Polyphenole, die Funktion und Eigenschaften von Proteinen, experimentelle Analysemethoden mittels HPLC sowie die biochemische Untersuchung von Stabilität und Reaktionsprozessen unter Hitzeeinwirkung.
Das primäre Ziel ist die qualitative Analyse möglicher Wechselwirkungen zwischen Quercetin und Lysozym bei Temperaturen von 60°C und 80°C, um den Einfluss auf die Stoffwechselverfügbarkeit des Quercetins zu bewerten.
Zur Untersuchung werden schwerpunktmäßig HPLC (High Performance Liquid Chromatography), Massenspektrometrie und Gelelektrophorese (SDS-Gele) eingesetzt.
Der Hauptteil gliedert sich in verschiedene Versuchsansätze, in denen Quercetin mit unterschiedlichen Proteinen (Lysozym, BSA, Hämoglobin) unter verschiedenen Zeit- und Temperaturbedingungen behandelt und analysiert wird.
Wichtige Begriffe sind Quercetin, Lysozym, Polyphenole, HPLC, thermische Stabilität, Proteinbindung und Proteindenaturierung.
Lysozym dient als Modellprotein, um die potenziellen Bindungsmechanismen von Quercetin an Proteine unter kontrollierten Bedingungen zu untersuchen.
Die Gelelektrophorese diente dazu, eine Veränderung des Molekulargewichts von Lysozym nach den thermischen Behandlungen auszuschließen, was darauf hindeutet, dass das Lysozym unter den gewählten Bedingungen stabil bleibt.
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