Expressionsanalyse von Genen des Kalziumhaushaltes in einem konditionellen Nexilin Knock-out Mausmodell

Inhaltsverzeichnis

• Zusammenfassung
• Abstract
• 1. Einleitung
• 1.1. Dilatative Kardiomyopathie
• 1.2. Nexilin
• 1.3. Cre-loxP Gen-Knockdown
• 1.4. Die Rolle von Kalzium bei der Muskelkontraktion
• 1.5. Proteine des Kalziumhaushaltes
• 1.6. Zielsetzung der Arbeit
• 2. Material
• 2.1. Biologisches Material
• 2.2. Chemisches Material
• 2.3. Technisches Material
• 3. Methoden
• 3.1. Hämotoxylin-Eosin-Färbung
• 3.2. Kollagen-Trichrom-Färbung
• 3.3. RNA-Isolation aus Geweben
• 3.4. Reverse Transkription
• 3.5. Polymerase Kettenreaktion (PCR) & Quantitative real-time PCR (qPCR)
• 3.6. Agarose-Gelelektrophorese
• 3.7. Proteinisolation aus Geweben
• 3.8. Proteinbestimmung nach Lowry
• 3.9. Western Blot
• 3.10. Coomassie Färbung
• 3.11. Ponceau-Färbung
• 4. Ergebnisse
• 4.1. Übersicht des gewählten Probensets
• 4.2. Nachweis eines reduzierten Nexilin Proteinlevels
• 4.3. Färbungen
• 4.4. Quantitative real-time PCR
• 4.5. Western Blot
• 5. Diskussion

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die Arbeit zielt darauf ab, die Rolle von Nexilin bei der Entwicklung der dilatativen Kardiomyopathie (DCM) im Zusammenhang mit der Expression von Proteinen des Kalziumhaushaltes zu untersuchen. Hierzu wird ein konditionelles Nexilin Knock-out Mausmodell verwendet, welches eine spezifische Inaktivierung des Nexilin-Gens in Kardiomyozyten ermöglicht.

• Untersuchung des Einflusses eines reduzierten Nexilin-Expressions auf die Entwicklung der DCM.
• Analyse der Genexpression von Proteinen des Kalziumhaushaltes in Nexilin Knock-out Mäusen.
• Identifizierung möglicher Veränderungen in der Kalziumregulation bei DCM im Zusammenhang mit Nexilin.
• Entwicklung eines geeigneten Mausmodells zur Untersuchung der DCM-Pathogenese.
• Bedeutung der Kalziumhomöostase bei der Entstehung und Progression der DCM.

Zusammenfassung der Kapitel

• Kapitel 1: Einleitung: Die Einleitung gibt einen Überblick über die dilatative Kardiomyopathie (DCM), Nexilin und seine Rolle bei der DCM, das Cre-loxP Gen-Knockdown-System, die Bedeutung von Kalzium bei der Muskelkontraktion sowie Proteine des Kalziumhaushaltes. Abschließend wird die Zielsetzung der Arbeit erläutert.
• Kapitel 2: Material: Dieser Abschnitt beschreibt die verwendeten Materialien, darunter biologisches Material (Mäuse), chemisches Material (Reagenzien) und technisches Material (Geräte).
• Kapitel 3: Methoden: Die Kapitel beschreibt die angewendeten Methoden, wie Hämotoxylin-Eosin-Färbung, Kollagen-Trichrom-Färbung, RNA-Isolation, Reverse Transkription, quantitative real-time PCR (qPCR), Western Blot und Proteinbestimmung.
• Kapitel 4: Ergebnisse: In diesem Kapitel werden die Ergebnisse der Experimente präsentiert, einschließlich des Nachweises eines reduzierten Nexilin-Proteinlevels, Färbungen von Herzschnitten, quantitativer real-time PCR-Daten und Western Blot-Analysen.

Schlüsselwörter

Dilatative Kardiomyopathie, Nexilin, Cre-loxP Gen-Knockdown, Kalziumhomöostase, Herzmuskel, Genexpression, Real-time PCR, Western Blot, Mausmodell.