Molekulare Analyse der Expression des TNF-Rezeptors 2 in der humanen Brustkrebszellinie MCF-7 nach Applikation von Antiestrogenen

Inhaltsverzeichnis

• 1 EINLEITUNG
• 1.1 Steroidhormone
• 1.1.1 Estrogene
• 1.1.1.1 Estrogenabhängige Tumore
• 1.2 Antiestrogene
• 1.2.1 Apoptose
• 1.2.1.1 Signaltransduktion apoptotischer Prozesse
• 1.2.1.1 Tumor-Nekrosis-Faktor α (TNFα)
• 1.2.1.2 TNF-Rezeptoren
• 1.3 Zielsetzung
• 2 MATERIAL UND METHODEN
• 2.1 Zellkultur
• 2.1.1 Zelllinien
• 2.1.2 Kulturbedingungen
• 2.1.3 Passagieren der Zellen
• 2.1.4 Hormonbehandlung
• 2.2 RNA-Präparation
• 2.2.1 RNA-Präparation mittels Trizol®
• 2.2.2 Quantifizierung von Nukleinsäuren
• 2.2.3 DNase-Verdau
• 2.3 Semiquantitative PCR (Diel et al. 1996; Murphy et al., 1990)
• 2.3.1 Ableiten der Primer
• 2.3.2 cDNA Synthese
• 2.3.3 PCR (Mullis et al., 1987)
• 2.3.4 Gelelektrophorese der PCR-Fragmente (Sambrock et al., 1989)
• 2.3.5 Dokumentation der Gele
• 2.4 Proteinisolierung aus MCF-7 Zellen
• 2.4.1 Proteinisolierung
• 2.4.2 Konzentrationsbestimmung
• 2.5 Western-Blot
• 2.5.1 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Laemmli, 1970)
• 2.5.2 Coomassie-Brilliant-Blue Färbung (Frazekas et al., 1963)
• 2.5.3 Semi-dry Blotting (Towbin et al., 1979)
• 2.5.4 Antikörperinkubation
• 2.5.5 Proteinnachweis durch das Lumi-Light Plus System
• 2.6 Material
• 2.6.1 Laborgeräte
• 2.6.2 Chemikalien
• 2.6.3 PCR Primer
• 2.6.4 Enzyme, Kits und weitere Materialien
• 2.6.5 Antikörper
• 3 ERGEBNISSE
• 3.1 Proteinisolierung aus Faslodex behandelten MCF-7 Zellen
• 3.1.1 Konzentrationsbestimmung der löslichen Proteinfraktionen
• 3.1.2 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese der Proteinproben
• 3.2 Western-Blot Analyse der Regulation des TNF-Rezeptors 2
• 3.3 Quantitative Analyse der mRNA-Expression mittels RT-PCR
• 3.3.1 Visuelle Qualitätskontrolle der isolierten RNA
• 3.3.2 RNA Präparation aus Faslodex behandelten MCF-7 Zellen
• 3.4 Semiquantitative PCR
• 4 DISKUSSION
• 4.1 MCF-7 Zellen als Modellsystem
• 4.2 Regulation des TNF-Rezeptors 2 nach Faslodex-Applikation
• 4.2.1 Western-Blot-Analyse
• 4.2.2 Semiquantitative PCR
• 4.2.3 Mechanismus der Regulation des TNF-Rezeptors 2
• 4.3 Funktion von TNF-R2 im Rahmen der Apoptoseinduktion
• 35 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die vorliegende Arbeit befasst sich mit der molekularen Analyse der Expression des TNF-Rezeptors 2 in der humanen Brustkrebszellinie MCF-7 nach Applikation von Antiestrogenen. Ziel ist es, die Regulation der TNF-Rezeptor 2 Expression durch Antiestrogene zu untersuchen und die mögliche Rolle des Rezeptors in der Apoptoseinduktion in Brustkrebszellen zu beleuchten.

• Estrogenabhängige Tumore und die Rolle von Antiestrogenen in der Therapie
• Apoptose als zellulärer Mechanismus des programmierten Zelltods
• Der TNF-Rezeptor 2 und seine Signaltransduktion in der Apoptose
• Die Modulation der TNF-Rezeptor 2 Expression durch Antiestrogene
• Die Bedeutung des TNF-Rezeptors 2 für die Apoptoseinduktion in Brustkrebszellen

Zusammenfassung der Kapitel

Die Arbeit gliedert sich in fünf Kapitel. Kapitel 1 führt in die Thematik ein und stellt die relevanten biologischen Hintergründe vor, darunter Steroidhormone, insbesondere Estrogene und Antiestrogene, sowie den Mechanismus der Apoptose. Kapitel 2 beschreibt die verwendeten Materialien und Methoden, darunter Zellkultur, RNA-Präparation, semiquantitative PCR und Western-Blot. Die gewonnenen Ergebnisse werden in Kapitel 3 präsentiert und interpretiert. Kapitel 4 widmet sich der Diskussion der Ergebnisse im Kontext des aktuellen Forschungsstandes und stellt mögliche Mechanismen der Regulation des TNF-Rezeptors 2 durch Antiestrogene vor.

Schlüsselwörter

TNF-Rezeptor 2, Antiestrogene, Brustkrebs, Apoptose, Zellkultur, RT-PCR, Western-Blot, MCF-7 Zellen, Signaltransduktion, Faslodex.