Klonierung eines genomischen DNA-Fragments mit für Lamin C codierenden Sequenzen

Inhaltsverzeichnis

• 1. Einleitung
• 2. Material
  • 2.1 Chemikalien
  • 2.2 Vektoren und Bakterienstämme
    • 2.2.1 λ-Phage EMBL3 und E.coli-Stamm P2392
    • 2.2.2 Plasmidvektor Bluescript und E.coli K12-Stamm DH5a
  • 2.3 Zusammensetzung häufig verwendeter Puffer und Medien
  • 2.4 Partiell verdaute DNA von EAT-Zellen
  • 2.5 Lamin C-cDNA-Sonden
• 3. Methoden
  • 3.1 Konstruktion einer genomischen Sequenzbank
    • 3.1.1 Ligation von EAT-DNA-Fragmenten mit EMBL3 Phagenarmen
    • 3.1.2 In vitro-Verpackung von rekombinierter Phagen-DNA
    • 3.1.3 Präparation von E. coli-Zellen für die Infektion mit λ-Phagen
    • 3.1.4 Infektion von E. coli-Zellen mit λ-Phagen
    • 3.1.5 Konzentrationsbestimmung von λ-Phagen in Suspension
    • 3.1.6 Amplifikation der Stammsequenzbank

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die vorliegende Inauguraldissertation befasst sich mit der Klonierung eines genomischen DNA-Fragments, das die Sequenzen für Lamin C kodiert. Ziel der Arbeit ist es, dieses Fragment aus dem Genom von Ehrlich-Ascites-Tumor (EAT)-Zellen zu isolieren und zu charakterisieren.

• Klonierung eines genomischen DNA-Fragments
• Charakterisierung der Sequenzen für Lamin C
• Erstellung einer genomischen Sequenzbank
• Anwendungen in der Zell- und Tumorbiologie
• Entwicklung neuer Methoden in der Molekularbiologie

Zusammenfassung der Kapitel

Das erste Kapitel gibt eine umfassende Einleitung in die Thematik der Klonierung von genomischen DNA-Fragmenten und die Bedeutung von Lamin C in der Zellbiologie. Kapitel 2 erläutert die verwendeten Materialien, darunter Chemikalien, Vektoren, Bakterienstämme, Puffer und Medien sowie die partiell verdaute DNA von EAT-Zellen und Lamin C-cDNA-Sonden. In Kapitel 3 werden die Methoden zur Konstruktion einer genomischen Sequenzbank beschrieben, die die Ligation von EAT-DNA-Fragmenten mit EMBL3 Phagenarmen, die In-vitro-Verpackung von rekombinierter Phagen-DNA, die Präparation von E. coli-Zellen für die Infektion mit λ-Phagen, die Infektion von E. coli-Zellen mit λ-Phagen, die Konzentrationsbestimmung von λ-Phagen in Suspension sowie die Amplifikation der Stammsequenzbank umfasst.

Schlüsselwörter

Genomische DNA, Lamin C, Klonierung, Sequenzbank, Ehrlich-Ascites-Tumor, λ-Phage, EMBL3, E. coli, In vitro-Verpackung, Infektion, Amplifikation.